巨型引物pcr法对抗cd3改型单链抗体

亲和力是影响改型单链抗体应用于临床的重要因素之一.利用巨型引物pcr定点诱变方法，设计并化学合成出两组含多个突变位点的简并引物，在第一轮pcr中使用简并引物分别扩增出含突变碱基的两条特异性的dna片段，即巨型引物，将其经琼脂糖凝胶电泳分离纯化后，作为3′和5′的两端引物应用于第二轮pcr反应中.通过改变标准pcr反应条件，调整引物与模板的浓度，扩增出特异性较强的目的dna条带.pcr产物经回收后，进行dna测序.测序结果表明利用该方法扩增得到特异的抗cd3改型单链抗体的突变体库.