大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因在毕赤酵母中的克隆表达及分离纯化(英)

根据同源性分析设计引物，通过rt-pcr方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总rna中合成扩增出类凝血酶基因，之后将该基因克隆到表达载体ppic9k中，经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中.经筛选得到甲醇快速生长型转化子his+mut+在500ml摇瓶中培养,甲醇诱导分泌表达.上清液中重组类凝血酶是通过两步柱层析得到：qsepharoseff和benzamidine-sepharose4bcl.与天然蛇毒类凝血酶一致，分泌表达的重组类凝血酶具有较强的酯酶活性，但精氨酸甲酯如tame的水解活性较弱.此重组类凝血酶在37℃中性溶液中保存过夜将分解成小肽，但在0℃下很稳定.该酶的最适ph为8.0.