重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a的制备及其在tpa突变体纯化中的应用

将基因工程菌株e.colibl21(de3)pet22b-metia高密度发酵,用异丙基硫代-β-d-半乳糖苷(iptg)诱导,重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a(retia)蛋白在e.coli中得到较高水平表达，表达量占菌体总蛋白的40%以上.经菌体破碎、包涵体变性、复性,二步柱层析纯化得到电泳纯的retia蛋白.测得retia对t-pa突变体(nta)的抑制平衡常数ki为8.72×10－8mol/l.据此利用纯化的retia蛋白制备retia-sepharose4b亲和层析柱.直接一步纯化nta复性液,纯化的nta纯度达90%以上,收率为96.2%,纯化倍数为13.2,比活为(565.7±71.3)u/μg.