大鼠shh-n融合蛋白的表达、纯化及功能研究

为了获得重组sonichedgehogn端蛋白（shh-n）并研究其功能，应用pcr技术扩增shh-ncdna，然后克隆至原核表达质粒中，转化e.coli后获得表达菌株,经1mmol/liptg诱导高效表达出带有his-tag的融合蛋白，其中大部分为可溶性蛋白，少量为包涵体.用his-tag特异性结合树脂纯化可溶性融合蛋白，经sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一区带，凝胶自动扫描分析表明，shh-n的纯度达85%以上.纯化后的shh-n在成纤维生长因子8(fgf8)的协同作用下，能诱导神经前体细胞（npc）向酪氨酸羟化酶阳性神经元（th+）发育.在此基础上可以诱导不同类型的人类干细胞定向分化为多巴胺(da)神经元，从而为临床治疗帕金森病（pd）提供充足的供体细胞.