smac/diablo在过氧化氢所致c2c12肌原细胞凋亡中的作用

为探讨smac/diablo在过氧化氢(h2o2）所致c2c12肌原细胞凋亡中的作用，采用hoechst33258染色,观察h2o2(0.5mmol/l)处理c2c12肌原细胞不同时间后,细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率,dna抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯状带,利用细胞成分分离后蛋白质印迹分析h2o2是否导致smac/diablo从线粒体释放,采用caspase检测试剂盒及蛋白质印迹分析caspase-3和caspase-9的活化,转染smac/diablo基因，观察smac/diablo过表达对h2o2所致的c2c12肌原细胞凋亡的影响.结果表明:h2o2处理1h后，smac/diablo从c2c12肌原细胞线粒体释放入胞浆，2h更明显；h2o2处理4h后，caspase-3和caspase-9活化，12h达高峰；h2o2处理24h后，c2c12肌原细胞显示特征性的凋亡形态改变，凋亡核百分率明显升高，dna电泳出现明显“梯状”条带.与单纯过氧化氢损伤组相比，smac/diablo高表达的c2c12肌原细胞经过氧化氢损伤组的caspase-3和caspase-9的活化、凋亡核百分率的升高、“梯状”条带的出现均更明显.结果表明，h2o2可导致smac/diablo从c2c12肌原细胞线粒体释放，促进caspase-9和caspase-3的活化而促进细胞凋亡的发生.