应用优化的双向电泳技术建立纤维堆囊菌so0157-2蛋白质组数据库

堆囊菌丰富的次级代谢产物是新药的重要来源，而蛋白质组学分析是研究代谢调控的有效方法．然而堆囊菌含有大量的胞外多糖以及黏液，干扰了蛋白质组学分析中蛋白质的溶解度、分辨率及重现性．为了高通量地筛选sorangiumcellulosumso0157-2表达的特异性蛋白，实验优化了s.cellulosumso0157-2双向电泳方法．首先，s.cellulosumso0157-2蛋白在裂解液中有更好的溶解度．ph3～10非线性胶条和1mg的蛋白上样量适用于第一向等电聚焦，分别提高了蛋白质点的分辨率和低丰度蛋白质的表达．15%sds-page改善了s.cellulosumso0157-2蛋白分离的分辨率和重现性．最终，通过优化的双向电泳方法获得了s.cellulosumso0157-2在m26培养基中培养3天的全蛋白质表达谱，并检测到552个蛋白质点．进而对表达蛋白通过maldi-tof-ms进行质谱鉴定，其中474个蛋白质得到鉴定，鉴定率85.9%．得到鉴定的蛋白质包括细胞结构和功能组分，以及细胞代谢合成酶类，其中8个蛋白质与糖类的转化和代谢相关，这有助于糖基化埃博霉素a的深入研究．该优化方法为进一步建立纤维堆囊菌so0157-2在各种培养条件下的蛋白质组表达数据库打下基础．