egcg干预lmp1激活的nf-κb信号转导通路中的靶分子

为阐明在鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,npc)细胞中茶多酚干预eb病毒潜伏膜蛋白1(latentmembraneprotein1，lmp1)激活的nf-κb信号转导通路中的靶分子，采用ebv阴性及阳性的鼻咽癌细胞系cne1和cne1-lmp1细胞，利用噻唑蓝(mtt)法，观察表没食子儿茶素没食子酸酯(egcg)对cne1和cne1-lmp1细胞生存率的影响.采用瞬间转染及报道基因法观察egcg对nf-κb活性的作用.利用间接免疫荧光法，观察egcg对nf-κb（p65）核移位的影响，再分别提取cne1和cne1-lmp1的胞浆及胞核蛋白，通过蛋白质印迹分析egcg抑制nf-κb（p65）的核移位后胞浆及胞核蛋白中nf-κb（p65）的变化.采用蛋白质印迹分析egcg对iκbα的磷酸化水平的影响.采用瞬间转染及报道基因法观察egcg对egfr启动子活性的影响，并用蛋白质印迹分析egcg对egfr自身磷酸化的作用.结果表明egcg对鼻咽癌细胞的抑制作用有剂量依赖性，并可抑制nf-κb的活性.egcg能抑制nf-κb（p65）的核移位，并抑制iκbα的磷酸化.egcg对nf-κb信号通路下游的靶基因egfr的启动子活性及自身磷酸化都有抑制作用.由上述结果可以推断，egcg对信号转导通路上的nf-κb、nf-κb（p65）、iκbα、egfr多个靶点分子具有干预作用.lmp1是eb病毒编码的蛋白质，因此，egcg抑制与病毒相联系的信号转导通路，可能是egcg抑制与病毒相关的肿瘤的分子机制之一.