蛋白质体外磷酸化方法的建立

蛋白质的磷酸化与去磷酸化调节方式在细胞信号传递过程中占有极其重要的位置.建立鉴定蛋白质磷酸化的可靠方法具有重要意义.毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白(ataxia-telangiectasiamutated,atm）是直接感受dna双链断裂损伤，并起始诸多dna损伤信号反应通路的主开关分子.电离辐射（ir）细胞学反应中，atm激酶可通过磷酸化活化p53蛋白，原核表达p53融合蛋白，免疫沉淀ir活化的野生型atm蛋白，进行蛋白质的体外磷酸化反应.实验验证了atm对p53蛋白的磷酸化作用.这一方法的建立可为研究细胞信号转导途径中蛋白激酶对底物的磷酸化作用及筛查激酶底物提供标准化的技术手段.