核因子-κb反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白报告系统的建立与应用

建立核因子-κb(nf-κb)反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白(d2egfp)报告系统，作为筛选nf-κb拮抗药物及研究其相关信号转导途径的工具.分别以egfp与d2egfp为报告基因、neor为筛选基因,构建成4×κb基序为增强子、sv40为基本启动子的报告基因载体p4κb-egfp和p4κb-d2egfp.两载体分别与p65载体瞬时共转染hek293细胞,通过比较不同时相点egfp和d2egfp的调控表达，证明p4κb-d2egfp是较理想的nf-κb反应性绿色荧光蛋白(gfp)报告基因载体.将p4κb-d2egfp稳定转染hek293细胞，从而获得nf-κb反应性报告细胞株hek-d2egfp.应用nf-κb“圈套”寡核苷酸(tfd)与p65载体瞬时共转染hek-d2egfp，1mg/lnf-κb和2mg/lnf-κbtfd组对p65蛋白诱导调控表达的d2egfp具有明显拮抗作用.结果表明，nf-κb反应性d2egfp报告系统可特异、灵敏、动态地反映和监测nf-κb的活性变化.