随机单链dna文库selex筛选寡核苷酸适配子方法的建立

指数富集配基的系统进化(selex)技术是一种新的组合化学技术.体外构建了一个长度为81nt、含有35个随机序列的单链dna(ssdna)文库，优化了ssdna文库扩增为双链dna(dsdna)文库的pcr反应条件.通过对比不对称pcr和生物素-链亲和素磁珠分离方法制备ssdna文库的效果，确定了以生物素-链亲和素磁珠分离方法制备ssdna.由于脱氧核糖核酸的疏水性导致ssdna文库与硝酸纤维素滤膜的结合背景过高，因此选择以微孔板为介质，分离与靶蛋白结合的适配子.经过9轮循环筛选，随机ssdna文库与丙型肝炎病毒(hcv)核心蛋白(c蛋白)的结合率从0.5%上升到32.5%.