用于fk506类小分子化合物筛选的细胞模型的建立

建立fkbp12/fas双聚体可诱导细胞凋亡生物效应的细胞模型，为fk506类小分子化合药物的初步筛选提供一个可应用的技术平台.首先利用rt-pcr方法钓取人源性fas胞浆区基因，测序鉴定正确后，插入到载体pc4m-fv2e中，构建pc4m-fv2e/fas表达质粒.然后将myr-fkbp12-fas融合基因从pc4m-fv2e/fas质粒克隆进pegfp-n1中.最后将重组质粒pegfp-n1/fkbp12-fas转染进hek293细胞,并利用g418筛选融合基因fkbp12-fas稳定表达的细胞株.实验结果显示，阳性化合物ap20187作用4～6h后,稳定转染的靶细胞发生凋亡，基因组呈现典型的“dnaladder”,而fkbp12的天然结合蛋白fk506可竞争性地阻断这种阳性药物诱导的细胞凋亡.研究提示：所构建的细胞模型,可用于以fkbp12为靶标、基于fk506空间构型设计合成的fk506类小分子化合药物的初步筛选.