a/u富集片段rna结合蛋白的固相纯化与鉴定

rna与细胞靶蛋白结合是rna发挥其生物学功能的重要基础，因此，分离和鉴定rna结合蛋白是研究rna功能的必要步骤．目前，rna结合蛋白的分离和鉴定方法较多，但各有优缺点．本实验利用可溶性碳二亚胺(edc)介导的缩合反应，将a/u富集片段rna共价偶联到固相介质aminem-270上，再用固定化rna经亲和层析从细胞抽提物中分离纯化rna结合蛋白，并以sds-page联合质谱分析和westernblotting等方法鉴定rna特异性结合蛋白．最后通过荧光原位杂交和共聚焦显微镜证明这些rna特异性结合蛋白确与rna在细胞内结合．实践证明这一方法简单、高效、易于掌握．