猪克隆胚胎激活方法优化与转人溶菌酶基因克隆猪的生产

为了提高转基因克隆效率和获得转人溶菌酶基因克隆猪，研究了不同电激活参数和化学辅助激活方法对猪克隆胚胎和孤雌胚胎体外发育的影响．结果发现：电场强度会显著影响克隆胚胎的融合率和体外发育能力(p<0.05)，电脉冲次数对克隆胚胎体外发育促进作用不显著(p>0.05)，而相同电激活条件下克隆胚胎和孤雌胚胎的体外发育能力变化趋势不同；电激活后再利用放线菌酮细胞松弛素b(chxcb)处理4h能显著提高克隆胚胎的囊胚率(p<0.05)，而用二甲基氨基嘌呤(6-dmap)处理没有提高克隆胚胎囊胚率(p>0.05)，但6-dmap或chxcb处理均可显著提高孤雌胚胎的囊胚率(p<0.05)．上述结果表明，最佳的孤雌激活条件并不一定是克隆胚胎的最佳激活条件．本研究中猪克隆胚胎的最佳激活方法为1.6kv/cm、100μs、2次直流电脉冲间隔100μs，再辅以chxcb处理4h．利用优化的激活条件成功获得了乳腺特异表达人溶菌酶的转基因猪，为猪转基因育种奠定了基础．