甲型副伤寒杆菌抗噬菌体及生物膜形成基因的筛选及鉴定

细菌生物膜(bacterialbiofilm，bf)与大部分的细菌感染相关，有助于病原菌抵抗外部不利的环境，包括抗生素和抗噬菌体等．为了研究生物膜和抗噬菌体的作用机制，本文以6株抗噬菌体甲型副伤寒杆菌(副甲菌)突变菌作为研究对象，在rif+(利福平)(200mg/l)平板中划线并滴加噬菌体验证能否抗噬菌体，将6株突变菌接种于96孔板中，每组3个重复，观察其成膜能力以及生物膜的形态，定点突变和互补实验验证突变菌的噬菌体抗性是否由突变基因所引起．结果显示：划线平板中野生型副甲菌在滴加1.2×106个噬菌体处出现空缺，而6株突变菌在滴加2.4×109个噬菌体后仍能生长，表明6株突变菌具有抗噬菌体特性；6株突变菌中，σ-54依赖的翻译调节器突变菌成膜能力(a595=1.1±0.2)较野生型副甲菌(a595=0.5±0.1)显著性增强，且差异显著(p<0.05)，光学显微镜下菌体聚集成粗大的不规则团块；同源重组敲除野生型副甲菌σ-54依赖的翻译调节器，突变菌出现噬菌体抗性，将表达σ-54依赖的翻译调节器的载体转化该突变菌，突变菌又恢复了噬菌体敏感性．结果表明，σ-54依赖的翻译调节器是抗噬菌体和生物膜形成相关的基因．