伊立替康联合去甲斑蝥素对人胃癌细胞作用的考察及协同作用机制研究

研究了伊立替康(cpt-11)联合去甲斑蝥素(nctd)对人胃癌细胞bgc-823增殖的影响及协同作用机制．分别利用cpt-1130、60、90、120、150μmol/l，nctd30、60、90、120、150μmol/l和两药按上述浓度1∶1联用，以及两药上述浓度完全交叉组合作用bgc-823细胞24、48和72h，并且以不同序贯方式作用bgc-823细胞24h．mtt法检测bgc-823细胞的增殖，采用中效原理评价两药联合作用；流式细胞术测定cpt-1160μmol/l、nctd60μmol/l和联合用药(60∶60)μmol/l，以及不同序贯方式作用bgc-823细胞24h后细胞周期及凋亡的情况；westernblot法检测cpt-1130、　60μmol/l，nctd30，60μmol/l和联合用药(30∶30，60∶60)μmol/l作用bgc-823细胞24h后pdcd4和p53蛋白表达水平．结果显示：cpt-11及nctd联合用药比单独用药对细胞增殖的抑制作用增强，ic50明显减小(p<0.05)，单独使用cpt-11或nctd作用24、48和72h时的ic50分别是联合使用时的2.83、3.15、2.19倍以及2.66、3.11、2.45倍，并且两药联合用药具有协同作用效应；两药合用24h时先给cpt-11方案抑制作用优于先给nctd方案，且优于同时给药方案(p<0.05)；cpt-1160μmol/l作用24h引起bgc-823细胞s和g2-m期阻滞(p<0.01)，nctd60μmol/l作用24h引起细胞g2-m期阻滞(p<0.05)，并诱导细胞凋亡(p<0.05)，联合用药(60∶60)μmol/l作用24h，主要引起细胞g2-m期阻滞(p<0.01)，与先给nctd6h方案及同时给药相比，先给cpt-116h方案主要引起细胞s期阻滞增加(p<0.05)以及细胞凋亡增加；cpt-1130、60μmol/l作用12h后pdcd4上调表达，p53下调表达(p<0.05)，nctd30、60μmol/l作用12h后pdcd4下调表达，p53上调表达(p<0.05)，联合用药(30∶30，60∶60)μmol/l作用24h后pdcd4及p53蛋白表达均上调(p<0.05)．上述结果表明：cpt-11联合nctd对人胃癌bgc-823细胞有协同抑制作用，其机制主要是诱导细胞g2-m期阻滞，并与抑癌基因蛋白pdcd4及p53上调表达有关；两种药物联用时序贯次序对联合作用有影响，先给cpt-11方案要优于先给nctd方案及同时给药方案，其机制主要是引起s期阻滞增加以及细胞凋亡增加；抑癌基因蛋白pdcd4与p53之间可能存在负调控关系．