斑节对虾溶菌酶基因的原核表达与产物活性检测

采用pcr方法对所克隆的斑节对虾溶菌酶基因的cdna进行改造,并克隆至含温控启动子prpl的大肠杆菌表达质粒pbv220,构建斑节对虾溶菌酶表达载体pbv220-lyz.该质粒转化大肠杆菌后经42℃诱导表达.sds-page电泳表明,表达产物中有16kd左右的特异性条带,与预期斑节对虾溶菌酶分子量相符.薄层扫描显示,重组斑节对虾溶菌酶约占全菌总蛋白的32%,纯化后的重组斑节对虾溶菌酶占全菌可溶性蛋白的90%左右.比浊法检测复性后产物的生物活性,结果表明重组斑节对虾溶菌酶的最适ph为6.0,最适温度为40℃.测定了重组斑节对虾溶菌酶对溶壁微球菌和几种鱼病原菌菌株的溶菌活力,结果表明,重组斑节对虾溶菌酶对溶壁微球菌、溶藻弧菌和鳗弧菌有较强的溶菌活力,对爱德华氏菌有一定的溶菌活力,对嗜水气单胞菌、副溶血弧菌和大肠杆菌dh5α溶菌活力较弱.