牙鲆淋巴囊肿病毒一抗原蛋白的确认及定位

以牙鲆淋巴囊肿病毒（lcdv）为抗原免疫balb/c小鼠，而后将小鼠脾细胞与p3u1骨髓瘤细胞融合，以囊肿组织冰冻切片的免疫荧光染色筛选杂交瘤细胞，阳性结果显示特异性块状荧光信号集中在囊肿细胞的细胞质边缘部分，且多个荧光信号相连呈现链圈状，有限稀释法克隆阳性杂交瘤细胞，三次克隆后获得4株稳定产生抗lcdv抗体的单克隆杂交瘤细胞株（1a8、1d7、2b6、2d11）。应用western-blotting法分析单抗识别蛋白的分子量，结果显示，单抗1d7和2b6均能特异性结合一条分子量116kd病毒多肽；应用免疫电镜技术定位单抗识别的抗原决定簇，结果发现胶体金颗粒集中吸附在病毒粒子衣壳周围，且背景清洁，无散在的金颗粒或其他污染物。实验结果说明分子量约为116kd的蛋白多肽为lcdv病毒衣壳蛋白，且具有线性抗原决定簇。