暗纹东方鲀非01霍乱弧菌的鉴定及毒力基因检测

在对养殖暗纹东方病害调查中，从呈典型症状病鱼腹腔和肠道粘液中分离到2株（j-1和h-3）菌株，经生化特性和血清型鉴定为非01群霍乱弧菌(non-01vibriocholerae)。注射、创伤和浸泡3种方式进行人工感染试验表现出较强的致病性，出现症状与自然发病鱼相同。为进一步确认分离菌株的分类地位，使用p1、p2引物，以非01群霍乱弧菌n92001菌株和01群霍乱弧菌n16961菌株为对照，对分离菌株进行pcr扩增，得到451bp的dna片段。根据现有霍乱弧菌肠毒素ctxa基因序列设计引物p3,p4，以n16961菌株为阳性对照，pcr扩增结果均得到大小为400bp的dna片段。在对h-3菌株的扩增片段进行纯化、克隆和测序，得到407bp序列，该菌株与n16961菌株中肠毒素ctxa基因序列的完全一致，证实该片段源于ctxa基因。进一步说明从暗纹东方体内分离到的j-1和h-3菌株具有霍乱肠毒素ctxa，有一定的致病力。