鲫血清转铁蛋白cdna克隆及系统发育进化序列分析

鱼类血清转铁蛋白是鱼类血清中一种非血红素结合铁的β-球蛋白.从genbank数据库查询发表的鱼类转铁蛋白cdna或基因序列,根据铁离子结合及转运功能位点,设计并合成了两对引物p1、p4以及p2、p3,克隆出鲫血清转铁蛋白cdna中的核心片段,长度为866bp.再根据克隆出的核心片段分别设计上游及下游两对引物p5、p6以及p7、p8,随后用race方法分别克隆出鲫血清转铁蛋白cdna的5'端(787bp)和3'端(1081bp)以及全长cdna,最后在计算机上排列出鲫血清转铁蛋白全长cdna,长度为2444bp.比较了14种鱼血清转铁蛋白cdna序列的同源性,其同源性在30%～80%之间,结果显示鲤科鱼类(鲫、银鲫、鲤及斑马鱼等)具有很近的亲缘关系;同时进行了系统发育进化分析,证实了鱼类血清转铁蛋白进化的保守性和氨基酸序列的高度同源性.