礁膜原生质体的分离及培养

为了开发礁膜人工育苗的新技术,以4%果胶酶和2%纤维素酶的甘露醇溶液,分离酶解经无菌处理的礁膜叶状体,在40mmol?l-1cacl2,0.7mol?l-1甘露醇,ph5.5,温度28℃,摇床速度50r?min-1旋转振荡3h的条件下,1.0g湿重礁膜可获原生质体约2?106个.原生质体分离后依次用比重为1.030、1.026、1.022的消毒海水(添加n、p、fe2、iaa、kb、vitc)培养,2d后已形成明显的再生细胞壁,3～4d后细胞开始分裂,8d后形成由4～8个细胞组成的细胞团,以后原生质有不同的发育形态,较常见的是形成由一共同胶质膜包被的类似亲本的叶状体组织块,另一种是原生质体形成孢子囊,成熟后,可产生许多游动孢子,再由游动孢子发育成正常形态的膜状配子体,第三种发育形态为偏离亲本正常形态的管状体.