抑制差减杂交法克隆牙鲆变态早期差异表达的基因

为了克隆变态早期牙鲆头部差异表达的基因，采用抑制差减杂交法，以变态前的仔鱼头部表达的rna作为驱动rna，建立了牙鲆变态早期的差减cdna文库，并利用相对定量rt-pcr对其进行了筛选。差减库的平均插入片段558bp左右，阳性率为81．8％。随机测定的45个克隆，在剔除假阳性克隆后，共得到22个不同的基因，其中13个为已知cdna的同源基因，而另外9个为已知蛋白的同源基因，分别为prolactinreceptor-like，col1a1，m3-muscarinicreceptor，sfrs3，tropomyosin，ribosomalproteinl27，ribosomal[rpteoms12，gapdh，col1a3。在所有22个基因中，col1a1基因在差减库中的分布频率最高，为22．2％。rt-pcr检测结果表明，在所检测的11个基因中，所有基因在右眼移动前后的牙鲆头部均有表达，只是体现在表达水平上的不同。