哈维氏弧菌外膜蛋白ompk基因的克隆及原核表达

根据哈维氏弧菌外膜蛋白ompk的基因序列设计一对引物,应用聚合酶链式反应(pcr)方法,从分离自患病大黄鱼的哈维氏弧菌基因组中扩增获得一段约800bp的序列。将其克隆到pgemteasy载体,测序结果证明该序列是哈维氏弧菌外膜蛋白ompk基因。用pcr方法去除其信号肽序列,定向克隆到原核表达载体pgex4t2构建重组表达质粒pgex4tompk。iptg诱导后能够在大肠杆菌bl21中高效表达分子量约为53kd的gstompk融合蛋白。用纯化后的融合蛋白免疫新西兰兔获得了高效价的抗血清。westernblotting分析表明,它与从哈维氏弧菌中提取的约27kd的外膜蛋白能够发生特异反应,提示外膜蛋白ompk可能是哈维氏弧菌的重要保护性抗原之一。