日本沼虾vasa蛋白的原核表达、抗体制备及其免疫鉴定

vasa基因具有在性腺中特异表达的特点,在生殖细胞分化与发育过程中起重要作用。从日本沼虾精巢cdna中克隆了vasa基因的阅读框,连接到pet-32a载体,构建重组表达质粒pet32a-vasa,转化大肠杆菌bl21,经iptg诱导融合表达,表达产物经sds-page分析表明,融合蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约85ku,表达量约占包涵体总蛋白的48.7%,westernblotting检测表明,融合蛋白可特异地被anti-his标签抗体识别。用ni2+-nta纯化后的融合蛋白免疫家兔,制备获得多克隆抗体,elisa显示该抗体效价达1∶160000,western免疫鉴定显示该抗体不仅能识别融合蛋白,而且也能识别日本沼虾性腺粗提液中的内源性vasa蛋白,免疫组化进一步显示,vasa蛋白主要分布在卵母细胞核周围和精原细胞质中,成熟精子中无信号,暗示vasa在日本沼虾生殖细胞发育分化过程中扮演重要角色。