黄颡鱼脑p-450芳香化酶基因的克隆和组织表达

p-450芳香化酶(p450arom)是催化雄激素生物合成雌激素的关键酶.本文采用rt-pcr和race法,首次分离和克隆了黄颡鱼脑p450芳香化酶基因hp450aromb,并使用荧光实时定量rt-pcr对其组织表达进行了研究.结果表明hp450arombcdna全长2080bp(不包括poly(a)),5′端非翻译区有25bp,3′端555bp(不包含poly(a)),阅读框(openreadingframe,orf)1500bp,编码500个氨基酸,推测的蛋白质分子量为56kda.同源性分析显示,hp450aromb的氨基酸序列与其它鱼脑p450arom具有70%以上的同源性,与其它鱼卵巢p450arom为60%左右同源,与人胚盘和鸡卵巢p450arom则为50%左右同源;但芳香化酶高保守区包括i-螺旋区,芳香化酶特异保守区ii及血红素结合区iii和其它鱼芳香化酶相比同源性分别为83%～96%,78%～86%和85%～100%.系统发育分析表明hp450aromb与鱼类脑p450arom属于同一分支的,并且也显示了黄颡鱼和鲶鱼分类地位最近,这和传统的分类一致.实时定量rt-pcr研究显示,hp450aromb在前脑,下丘脑,垂体、卵巢、精巢均有表达,在肝脏没表达,表达量脑部高于性腺,但雌雄鱼脑部hp450aromb的表达总量没显著差异.