牙鲆变态早期cdna文库的构建和parvalbumin基因的克隆

在前期的研究中,克隆到牙鲆变态早期和变态前差异表达的parvalbumin基因片断cdna.为了克隆parvalbumin基因的全长cdna,构建了变态早期(孵化后23d仔鱼)牙鲆头部的全长cdna文库,并对文库的滴度和插入片段大小进行了评估.同时采用锚定pcr法从cdna文库筛选出parvalbumin基因的全长cdna.结果表明,所构建的牙鲆变态早期头部cdna文库的滴度为1.2?106pfu?ml-1,插入片段的平均长度为1000bp左右.parvalbumin基因的全长cdna的长度为603bp,编码109个氨基酸,含有两个ef手型钙离子结合域:dqdgsgfieeeel(52～64)和dsdgdgkigveef(91～103),以及一个atp/gtp结合位点模序:acglagks(33～40),是一种典型的钙离子结合蛋白.通过parvalbumin基因氨基酸序列的同源比较分析表明,牙鲆parvalbumin基因是比较保守的蛋白,与其它鱼类享有61.5%～68.8%序列同源.系统分析表明,牙鲆的parvalbumin基因与狭鳕(theragrachalcogramma)最为接近.