罗氏沼虾诺达病毒单克隆抗体的制备及应用

罗氏沼虾肌肉白浊病(whitishmusclediseaseofmacrobrachiumrosenbergii)是一种发生在罗氏沼虾苗种阶段的流行病,发病虾苗出现肌肉白浊、白斑或白尾症状,死亡率高达60%以上.作者所在实验室在确定其病原是罗氏沼虾诺达病毒(macrobrachiumrosenbergiinodavirus,mrnv)的基础上,用mrnv免疫balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与sp2/0鼠骨髓瘤细胞融合,用间接elisa筛选阳性孔,经有限稀释法克隆,得到12株能特异分泌抗mrnv的单克隆抗体(mab)的杂交瘤细胞.注射小鼠,制备腹水单克隆抗体,elisa效价为1∶105～106.亚型鉴定结果表明,有6株单抗为igg1型,4株单抗为igg2a型,2株单抗为igg2b型.12株单抗与对虾白斑综合征病毒(wssv)和桃拉综合征病毒(tsv)均无交叉反应.挑选效价高的腹水单抗2b5,建立了检测罗氏沼虾诺达病毒的三抗体夹心酶联免疫吸附测定(tas-elisa)法,该方法检测灵敏度达0.98ng左右.wesrternblot分析表明,2b5能与mrnv43kd的外膜蛋白特异性结合.