应用多重pcr检测水生动物源气单胞菌安徽分离株的毒力基因型分布

粘附素(aha1)、气溶素(aera)和细胞兴奋性肠毒素(alt)是气单胞菌的主要毒力因子.根据aha1、aera和alt基因序列设计三对引物建立了可同时检测三种毒力基因的多重pcr方法(mpcr).该方法扩增出气单胞菌的aha1大小为1087bp,aera为721bp,alt为480bp,其敏感度为102cfu?ml-1.而对金黄色葡萄球菌、恶臭假单胞菌、拟态弧菌以及非致病性气单胞菌均未扩增出任何条带.用限制性内切酶ecorⅴ、bamhⅰ和fbaⅰ分别酶切pcr扩增产物,均获得与预期一致的酶切图谱.用建立的mpcr对15株水生动物源气单胞菌安徽分离株进行毒力基因检测,结果显示在13株致病性气单胞菌中10株细菌的毒力基因型为altaha1aera,2株为altaha1-aera-,1株为altaha1aera-;alt、aha1和aera基因在气单胞菌中的携带率分别为100%、84.62%和76.92%.表明气单胞菌安徽分离株的主要毒力基因型是altaha1aera的高毒力表型,alt毒力基因普遍存在于不同表型种气单胞菌中.