斑点叉尾鮰呼肠孤病毒ccrv诱导cck细胞凋亡的研究

为研究斑点叉尾鮰呼肠孤病毒(ccrv)诱导斑点叉尾鮰肾脏细胞(cck)发生凋亡的机理,以ccrv感染的cck细胞为实验材料,采用hoechst33258染色、dna片段化检测、tunel反应、亚g1期细胞检测以及线粒体膜电位变化检测等方法进行实验。感染试验结果显示,病毒感染斑点叉尾鮰肾脏组织细胞后,细胞变圆、皱缩,随后细胞脱落,细胞单层呈网状,感染72h后出现典型细胞病变效应(cpe);病毒感染48h后hoechst33258染色结果显示,细胞的染色质固缩、核边缘化或破裂,可观察到凋亡小体,细胞凋亡率随时间增加;dna片段化检测结果显示,病毒感染细胞12h后细胞基因组dna出现片段化,随后逐渐增强,72h达到最高;tunel反应结果表明,病毒感染细胞72h后细胞基因组dna断裂,有大量游离3′末端自由羟基(-oh)存在。亚g1期细胞检测结果显示,病毒感染48h后,约53.44%细胞处于亚g1期;利用jc-1检测试剂盒检测病毒感染细胞的线粒体膜电位变化,病毒感染细胞24h后线粒体膜通透性发生改变,膜电位变化显著。紫外线灭活与热灭活的斑点叉尾鮰呼肠孤病毒不能诱导斑点叉尾〖xcf5h.tif；?.5?.5〗肾脏细胞发生凋亡,表明细胞凋亡依赖于病毒复制。