中华绒螯蟹精巢特异表达蛋白dmrt-like:抗体制备及免疫鉴定

dmrt是性别调控因子doublesex和mab-3的相关基因,近年报道了中华绒螯蟹esdmrt-like只在精巢中表达,为了验证esdmrt-like蛋白是否在中华绒螯蟹精巢中特异表达及其功能,根据中华绒螯蟹esdmrt-like基因序列,构建重组质粒pet-32a-esdmrt-like,转化大肠杆菌bl21,经融合表达和sds-page分析表明,融合蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约为46ku。利用ni柱亲和纯化融合蛋白免疫家兔,制备获得esdmrt-like多克隆抗体。western-blotting检测表明该抗体既能特异地识别重组蛋白,又能特异识别精巢中esdmrt-like蛋白,并且该抗体仅在精巢中检测到esdmrt-like蛋白的表达,分子量约为52ku,为预期单体分子量的二倍。western-blotting检测变性后精巢总蛋白,该抗体能识别52和34ku两条条带,证明了二聚体的存在。这一结果暗示esdmrt-like可能通过形成二聚体形式调控中华绒螯蟹精巢发育。