红螯光壳螯虾(cheraxquadricarinatus)酚氧化酶原基因的克隆与表达分析

利用race技术从红螯光壳螯虾血细胞中克隆到酚氧化酶原基因cqpropo,cqpropo基因cdna全长为2962bp,开放阅读框为1998bp,编码665个氨基酸,n端含有38个氨基酸的信号肽序列,其结构中含有两个铜离子结合位点,预测分子量为75.86kda；同源性比对结果显示红螯光壳螯虾cqpropo与克氏原螯虾酚氧化酶原的同源性最高为79%,其次是淡水螯虾74%、挪威龙虾69%、美国龙虾67%等；进化分析发现cqpropo与克氏原鳌虾、淡水螯虾、挪威龙虾、美国龙虾等虾的酚氧化酶原亲缘关系最近；realtime-pcr实验结果表明,cqpropo在血细胞中表达水平最高,其次是肠、触角腺、鳃等；在肝胰腺中有适量表达；wssv感染后红螯光壳螯虾cqpropomrna在血细胞、肝胰腺和鰓组织中具有不同的时空表达趋势,但感染组和免疫后感染组mrna表达量分别在感染后12h和24h达到最大值,且在3种组织中2个感染组的cqpropo表达量约为对照组的1.3-2.55倍,显著高于对照组(p<0.05),之后cqpropo基因的转录水平明显下降。免疫后再受病毒感染的虾,cqpropomrna的表达量在3种组织中总体高于感染组,表明免疫增强剂可使机体的抗病毒能力增强,对防御wssv感染具有一定的免疫保护作用。