草鱼呼肠孤病毒gcrv-gd108株vp5蛋白功能及免疫原性分析

在前期研究中分离到一株草鱼呼肠孤病毒,gcrv-gd108,并获得其全基因组序列。该病毒株的m5基因编码vp5蛋白,该蛋白与哺乳动物正呼肠孤病毒μ2蛋白具有较高的同源性及相似的ntpase结合保守区域,推测vp5蛋白也同样具有ntpase活性。为检测vp5蛋白是否具有ntpase活性及其是否具有免疫保护作用,采用已构建的原核表达载体表达vp5重组蛋白,通过孔雀绿钼酸铵法检测纯化后的重组蛋白的ntpase活性。采用dnastar软件预测m5基因编码蛋白的抗原性,综合蛋白亲水性、表面可及性与表面抗原性三项指标,预测编码蛋白可形成抗原表位的氨基酸区域数多达86个,提示vp5蛋白具有较强的免疫原性。用重组蛋白vp5免疫健康草鱼,通过人工攻毒实验检测vp5蛋白的免疫保护作用。结果显示,vp5重组蛋白具有ntpase活性,且其ntpase活性依赖于mg2+或na+/k+,而ca2+的存在可能抑制其活性;vp5蛋白可诱导草鱼产生高水平的抗体滴度,并显著提高igmmrna的表达水平,但未能为草鱼提供抗gcrv感染的保护。研究首次证实gcrv-gd108株vp5蛋白具有ntpase活性,但不能为草鱼提供免疫保护作用。