吉富罗非鱼sigm基因多克隆抗体的制备及组织定位分析

为研究sigm在吉富罗非鱼体内的组织分布及其在亚细胞水平上的定位，本实验利用纯化的sigm融合蛋白，按照常规方法免疫新西兰大白兔，制备了兔抗吉富罗非鱼sigm多克隆抗体；并对吉富罗非鱼肠、脾脏及鳃组织进行了免疫组织化学分析以及胶体金免疫电镜分析。结果显示，elisa检测所获得的抗血清效价为1：256000，该血清能与sigm融合蛋白发生特异性免疫反应。在肠和鳃组织中，阳性信号存在于富含黏液细胞的上皮细胞层表面，在杯状细胞和黏液细胞中则不存在；在脾脏组织中，阳性信号存在于特定的细胞中。免疫电镜结果显示sigm主要存在于肠上皮细胞膜附近，并且在肠组织上皮细胞膜表面的微绒毛处含量较多；在鳃上皮组织中，sigm主要存在于包围鳃丝和鳃小片的上皮细胞及部分红细胞内；而在脾脏组织淋巴细胞内部高尔基体的分泌小泡处存在大量的胶体金颗粒。研究表明，sigm在鱼体黏膜免疫中具有重要作用，这为探讨鱼类sigm的特性及功能奠定了基础，并丰富了鱼类黏膜免疫的研究内容。