虹鳟igm重链恒定区的表达及兔抗血清的制备

为了能够成功表达虹鳟igm，本研究利用生物信息学软件对虹鳟igm的亲水性及抗原性进行了分析，根据genbank收录的虹鳟igm重链恒定区，参照生物信息学分析结果，设计用于扩增截短的igm基因的引物，以虹鳟头肾rna提取物为模板，利用rt-pcr方法扩增虹鳟截短的igm重链恒定区部分基因片段，连接原核表达载体pet-27b，利用大肠杆菌rosetta进行表达。sds-page及hplc结果显示，纯化后截短的igm大小约为47.7ku，且纯度达到90%。利用其制备兔抗血清后elisa分析结果显示，所制备的兔抗血清与本研究所表达的截短igm蛋白的反应效价为1：40000，与虹鳟血清提取的全长igm反应效价为1：20000并且呈现出抗原计量依赖性。研究表明，重组igm蛋白与虹鳟血清中的天然igm重链恒定区具有近似的结构，利用其所制备的兔抗血清能够与虹鳟鱼体中的天然igm发生特异性反应。