凡纳滨对虾酚氧化酶原激活因子基因的克隆及表达分析

为研究酚氧化酶原激活因子（prophenoloxidase-activatingfactor，ppaf）在凡纳滨对虾感染传染性皮下及造血组织坏死病毒（ihhnv）过程中所起的免疫作用，实验采用逆转录聚合酶链式反应和cdna末端快速扩增技术克隆了凡纳滨对虾ppaf基因的全长cdna序列，并通过实时荧光定量pcr技术分析了该基因在正常凡纳滨对虾和感染ihhnv凡纳滨对虾不同组织的表达情况。结果显示，克隆获得了1986bp凡纳滨对虾ppaf基因cdna全长序列（genbank登录号jq684529），其中含有一个1629bp开放阅读框（orf），两翼分别存在21bp（5’端）和336bp（3’端）的非翻译区。该基因的开放阅读框共编码542个氨基酸，氨基酸序列269～517处存在功能结构域——丝氨酸蛋白酶结构域，氨基酸序列494～502区域存在一个alpha-2巨球型免疫蛋白功能位点，316～321区域有一个组氨酸酶活性位点；定量pcr分析发现，该基因无论在正常对虾还是感染ihhnv对虾的心脏、肝胰腺、肠、胃和肌肉中的表达量均较低，在血液和鳃腺中的表达量明显高于其他组织，但感染ihhnv对虾不同组织中ppaf基因的表达量均低于正常对虾相应组织中的表达量。定量检测ppaf基因在对虾鳃腺组织中的表达情况显示，对虾感染ihhnv后，ppaf基因的表达量急剧降低，3h时至最低，之后表达量逐渐上升，48h时达最高值。研究表明，ihhnv可抑制ppaf基因的表达，因而抑制酚氧化酶原免疫系统的有效激活，或是其感染对虾并在对虾组织内增殖的原因之一。