三疣梭子蟹cyp302a1基因克隆及其表达分析

细胞色素p450(cyp)302a1是昆虫蜕皮激素合成通路中的关键酶,为了研究其在三疣梭子蟹蜕皮过程中的调控作用,实验采用反转录pcr(rt-pcr)和cdna末端快速扩增(race)技术,克隆得到了三疣梭子蟹cyp302a1全长cdna序列(genbank登录号:km596851)。该序列全长为3171bp,包含一个长度为1626bp的开放阅读框,编码541个氨基酸;序列分析显示该氨基酸含helix-c、helix-k、helix-i、perf及heme-binding共5个p450特征保守区域;系统进化树分析发现三疣梭子蟹cyp302a1与日本剑水蚤cyp302a1聚为一小支,再与其他物种cyp302a1聚为一支。采用实时荧光定量pcr(qrt-pcr)技术分析了cyp302a1在不同组织和蜕皮过程中的表达水平变化。结果显示,cyp302a1的表达量在y器中最高,而在其他组织中均极低(p<0.05);蜕皮过程中,cyp302a1在蜕皮后期(a、b期)表达量最低,从蜕皮间期(c期)开始上升,至蜕皮前期的d1亚期达到最大值,随后下降。结果表明cyp302a1在三疣梭子蟹蜕皮调控中可能起着重要作用。