尼罗罗非鱼3种siglecslike融合蛋白在cos-7细胞中的表达及其结合活性的初步研究

为获得尼罗罗非鱼siglecslike融合蛋白,开展相关siglecslike蛋白的功能研究,深入了解罗非鱼与无乳链球菌相互作用机制。本研究利用前期构建的3个含siglecslikeorf的克隆质粒,pcr扩增获得siglec-1、siglec-4b和siglec-14like的膜外段序列,插入真核表达载体pcdna3.1(+)higg1fc中,双酶切、测序鉴定后转染cos-7细胞。qpcr、western-blot对目的蛋白的表达进行检测;亲和层析法纯化融合蛋白,sds-page电泳检测纯化效率。elisa检测融合蛋白与gbs的结合活性。测序结果显示,成功构建3个融合蛋白真核表达载体pcdna3.1(+)higg1fc-siglecslike/ex。检测结果显示,转染细胞中3个siglecs/ex-fc融合蛋白在mrna和蛋白水平都有高效表达,且过柱后的融合蛋白具有较高纯度;3个融合蛋白与罗非鱼源gbs的结合活性较对照组均有显著差异。研究表明,利用真核表达系统成功制备了具有较高纯度的尼罗罗非鱼3种siglecs融合蛋白,且均有与gbs的结合活性。