斜带石斑鱼生长激素cdna克隆及其在大肠杆菌中的融合表达

通过构建斜带石斑鱼垂体cdna文库,克隆了其生长激素(gh)全长cdna.斜带石斑鱼gh全长cdna为955bp,编码的多肽为204aa.应用pcr方法把编码gh成熟肽的cdna片段克隆到表达载体pet-15b,在大肠杆菌bl21(de3)表达n端含6个组氨酸的融合多肽.sds-page结果表明,0.4mmol@l-1iptg诱导表达的蛋白约为24kda,主要为不溶性的包含体.细菌裂解液沉淀溶于6mol@l-1盐酸胍后,用ni2-nta树脂进行亲和分离纯化,纯化产物在sds-page上表现为一条24kda的蛋白带.在黑鲷gh放射免疫分析系统中,纯化产物能与黑鲷gh竞争结合gh抗体,表明大肠杆菌表达的斜带石斑鱼gh融合多肽具有gh免疫活性.