拟穴青蟹phgpx基因的克隆及其表达分析

为了探讨磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(phospholipidhydroperoxideglutathioneperoxidase,phgpx)在拟穴青蟹免疫防御反应和精巢发育中的作用,实验从拟穴青蟹转录组数据库中筛选出phgpx基因的est序列,利用smart-race技术克隆得到该基因的全长cdna,命名为sp-phgpx。通过相关生物信息学软件对该序列进行分析,运用实时荧光定量技术对sp-phgpxmrna在成熟雌雄拟穴青蟹各组织、性腺不同发育时期以及h2o2和脂多糖(lps)应激下鳃和肝胰腺组织中的表达情况进行分析。结果发现,sp-phgpx基因的cdna全长为1024bp,编码180个氨基酸。同源性分析和系统进化树分析表明,sp-phgpx与其他物种的phgpx(gpx4)亲缘关系较近。实时定量pcr结果显示,sp-phgpx在成熟拟穴青蟹雌雄各组织中均有不同程度的表达,其中精巢的表达量最高。在性腺不同发育阶段,sp-phgpx在卵巢发育过程中的表达量差异不显著;而在精巢发育过程中,其表达量在精子细胞期(t2期)显著高于精母细胞期(t1期)和成熟精子期(t3期),同时也显著高于卵巢发育各时期的表达量。在lps应激下,鳃和肝胰腺中sp-phgpx的表达量分别在6和12h显著上调;h2o2应激下,鳃中的表达量在3h显著升高,肝胰腺中的表达量在被检测的各时相中无显著差异。研究表明,sp-phgpx可能在免疫防御反应以及精巢的发育和成熟等过程中发挥着重要作用。