鱼类神经坏死病病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其特性

利用rt-pcr技术获得病毒性神经坏死病毒0603株的衣壳蛋白基因，将其插入到杆状病毒bac-to-bac表达系统的pfastbacⅰ质粒中，构建了pfastbac-cp质粒。转化dh10bac大肠杆菌后获得重组穿梭载体bacmid-cp，脂质体介导将其转染sf9细胞产生有感染性的重组杆状病毒acnpv-cp。利用acnpv-cp感染sf9细胞后，sds-page分析可见大小约为37ku的特异性蛋白带，western-blotting分析发现，其可以与病毒性神经坏死病毒阳性血清反应出现特异性的杂交带。试验结果表明，acnpv-cp在sf9细胞中成功地表达了病毒性神经坏死病毒的衣壳蛋白，其具有良好的免疫学活性。负染电镜观察发现，cp蛋白可自行装配成病毒样颗粒，其大小形态类似于病毒性神经坏死病毒。制备超薄切片后电镜观察发现，cp蛋白自行装配成的病毒样颗粒呈晶格状排列在细胞质中。为研制有效防控鱼类病毒性神经坏死病的新型颗粒性疫苗奠定了基础。