鲤肠道sglt1基因的表达与抗体制备

钠/葡萄糖共转运载体1(sodium/glucosecotransporter1,sglt1)是协助葡萄糖吸收的主要蛋白。实验首先采用rt-pcr获取sglt1基因全长,克隆至pgme-t载体进行序列及免疫原性分析,选择长度为92个氨基酸(544~637)的多肽作为目的片段(sglt1-p),扩增sglt1-p,引入双酶切位点ecorⅰ和hindⅲ后,连接至pet-32a(+)上,构建表达载体pet-32a(+)-sglt1-p,转化至e.colirosetta中,获得重组基因工程菌,通过iptg诱导表达,获得目标多肽,并以此为抗原制备sglt1特异性抗体。sds-page电泳分析表明,目标多肽分子量约为30ku。采用耳缘静脉结合皮下注射,免疫新西兰长耳兔,免疫总时长为38d。制备了鲤sglt1抗体,elisa测得效价为1:105;免疫组化结果表明,抗体具有较高亲和力和特异性,可以应用于鲤sglt1的表达定位研究。该抗体的获得为鲤肠道sglt1表达及转运活性的系统研究奠定了基础,同时,获取的sglt1抗体亦可用于其它鱼类sglt1转运蛋白表达定位和定量研究。