溶藻弧菌hy9901鞭毛蛋白flab基因的克隆及原核表达

参照genbank上登录的弧菌鞭毛蛋白flab基因序列设计引物，pcr扩增溶藻弧菌hy9901株的flab全长基因，序列分析结果显示该基因为1134bp，编码377个氨基酸。与genbank中其它弧菌的同源基因序列比对显示，溶藻弧菌flab基因与副溶血弧菌flab基因的同源性最高(92%)。将该基因定向克隆到原核表达载体pet-32a(+)中，在大肠杆菌bl21(de3)中成功表达出带his-tag的融合蛋白，分子量大小与预期一致。优化的表达条件为28℃，0.4mmol/liptg浓度诱导10h。用纯化后的融合蛋白免疫spf级小鼠，制备了多克隆抗体。westernblotting结果表明鼠抗flab血清不仅能与诱导后的重组蛋白发生反应，而且能与天然的溶藻弧菌全菌蛋白发生反应，提示鞭毛蛋白flab可能是溶藻弧菌的重要保护性抗原之一，为下一步进行flab蛋白免疫原性的研究以及疫苗的制备奠定了基础。