大菱鲆胰岛素样生长因子-i成熟肽的克隆、重组表达及活性分析

通过rtpcr方法从大菱鲆肝组织克隆了胰岛素样生长因子-i（igf-i）成熟肽片段，分析表明，此成熟肽由70个氨基酸残基组成，含有3个链内二硫键。将扩增片段克隆到原核表达载体pgex4t-1上，实现了igf-i成熟肽和gst蛋白在escherichiacolibl21（de3）plyss中的融合表达。融合蛋白分子量约为34ku，诱导4h时占菌体总蛋白的59％，主要以包涵体形式存在。western-blotting免疫印迹表明,融合蛋白可以特异性地被anti-gst抗体识别。包涵体经6mol/l盐酸胍变性溶解及脉冲法稀释复性后，通过gstrapff亲和预装柱纯化，获得了电泳分析纯的融合蛋白。以细胞增殖实验检测蛋白生物活性，结果显示,纯化蛋白能促进大菱鲆肾脏细胞的增殖。