日本蟳微卫星富集文库的建立与多态性标记的筛选

采用磁珠富集法筛选日本蟳微卫星分子标记。日本蟳基因组dna经sau3aⅰ酶切后,收集400~1200bp大小的片段并纯化,利用生物素标记的寡核苷酸探针(ac)15从中筛选出含有微卫星序列的dna片段,连接到pmd18-t载体中,构建富集微卫星序列的基因组文库,经pcr检测筛选出阳性克隆进行测序。从随机挑选的970个菌落中筛选出369个阳性克隆进行测序,结果86.99%(321个)含有微卫星序列,其中完美型占80.54%,非完美型占15.95%,混合型占4.28%。除使用的探针ac重复外,还得到ga、ct等重复序列。共设计出102对微卫星引物,其中65对能扩增出清晰条带,27对具有多态性。同时筛选出的微卫星标记可为今后研究日本蟳的分子遗传育种提供有效的遗传标记。