草鱼apn基因的克隆及表达特征

氨肽酶n（apn）是肽酶m1家族的成员之一,在蛋白质的消化中发挥重要作用。采用同源克隆和race技术首次克隆草鱼apn基因的全长cdna序列。该cdna全长为3258bp,包含27bp的5￠utr序列,552bp的3￠utr序列,2679bp开放阅读框,编码892个氨基酸;草鱼与斑马鱼基因同源性和编码氨基酸同源性分别为81.5%和75.4%,与其他动物同源性分别为58.8%~61.2%和54.3%~60.2%。经预测,其编码蛋白的分子量为100.61ku,等电点为5.14,该蛋白具有与哺乳动物十分相似的1个螺旋跨膜结构,但跨膜区氨基酸同源性较低;系统进化分析表明,草鱼apn基因与斑马鱼的亲缘关系最近;利用real-timepcr技术检测了该基因的发育表达,结果显示草鱼出膜4d后apnmrna表达量相对稳定;apn在草鱼前肠、中肠和后肠均有较高的表达量,以前肠组织表达量最高;昼夜节律研究发现,肠道apn基因06:00-18:00的表达量较18:00-06:00高。