rna干扰技术抑制新家坡石斑鱼虹彩病毒感染细胞多肽icp46与绿色荧光蛋白融合基因的表达

新加坡石斑鱼虹彩病毒（singaporegrouperiridovirus，sgiv）是一种严重的能引起全身性疾病的病原体，对石斑鱼养殖造成了重大的经济损失。将含有sgiv感染细胞多肽icp46（infectedcellpolypeptides46）基因的真核表达载体pegfp-icp46转染到胖头鲤细胞（fatheadminnowcells，fhm）中进行融合表达，用荧光显微镜观察到icp46-gfp融合蛋白主要分布于fhm细胞的细胞质中。根据sgiv-icp46的序列，设计并体外化学合成了特异性干扰sgiv-icp46的sirna（sirna-icp46），与pegfp-icp46共转染到fhm细胞中，通过荧光显微镜观察不同时间点荧光强度的变化。转染后24~48h，实验细胞（共转染sirna-icp46和pegfp-icp46）和阳性对照细胞（共转染sirna-gfp和pegfp-icp46）中的荧光微弱，发荧光的细胞数量较阴性对照（共转染sirna-negative和pegfp-icp46）少70%左右，但其后实验细胞和阳性对照细胞的荧光强度开始增强，在转染后72h其与阴性对照组已差别不大。说明体外化学合成的sirna-icp46转染后24~48h可有效抑制fhm细胞中外源导入sgiv-icp46基因的表达。