用免疫蛋白质组学方法筛选哈氏弧菌免疫反应蛋白

用免疫蛋白质组学的研究方法鉴定了哈氏弧菌的免疫反应蛋白。将哈氏弧菌接种于tsb培养基28℃培养18h，利用裂解液裂解细菌，提取全菌可溶性蛋白，一向电泳采用7cmph4～7的胶条进行等电聚焦，二向用12.5%的sdspage胶分离蛋白质，考马斯亮蓝染色，获得双向电泳图谱，再结合免疫转印技术检测免疫反应的蛋白质，利用imagemaster2dplatinum进行配对分析得到15个非特异性的免疫反应性蛋白点，30个特异性的免疫反应性蛋白点。经过鉴定得到13种非特异性的免疫反应性蛋白质，这其中有2对蛋白在胶上的位置不同，但鉴定为同一种蛋白；同时得到28种特异性的免疫反应性蛋白质，有一个蛋白点没有在数据库中查找到相对应的蛋白质，还有1对蛋白在胶上的位置不同，但鉴定为同一种蛋白。将特异性免疫反应蛋白鉴定结果与非特异性比较发现有1对蛋白鉴定为同一种蛋白；另外，no.17和no.19是f0f1atpsynthase的两个亚基。特异性免疫反应蛋白鉴定结果中有6个蛋白质是已知的其他细菌的具有免疫反应的蛋白，分别为ompn,ompw,ompu,alaninedehydrogenase,elongationfactorts(efts),cysteinesynthase成功建立了哈氏弧菌的免疫蛋白质组学研究方法,筛选出28种具有特异性免疫反应的蛋白质，为哈氏弧菌的免疫蛋白研究提供理论依据和操作框架。