传染性胰腺坏死病毒vp3蛋白的原核表达及抗原性分析

应用rt-pcr方法扩增了ipnv编码内衣壳vp3蛋白的基因615bp，将vp3基因克隆至原核表达载体pet30b，并在大肠杆菌bl21中得到了表达。通过sds-page分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小约30ku的vp3蛋白，与理论值相符，经薄层扫描分析表明目的蛋白表达量可占菌体总蛋白的30%。用镍离子亲和层析柱纯化可溶性的vp3蛋白，并制备抗血清。western-blotting结果显示，vp3蛋白可被兔抗ipnv阳性血清识别；间接elisa结果显示，ipnv细胞培养物作为抗原，兔抗vp3蛋白高免血清稀释度为1∶25600时，p/n>2，抗血清可与ipnv全病毒发生反应，以上两项结果说明,表达的vp3蛋白与天然的ipnvvp3蛋白一样具有相同的抗原性。试验利用原核表达系统成功地高效表达了ipnvvp3蛋白，融合蛋白以可溶性形式存在，并制备了高效价的抗血清。