罗非鱼肠蛋白酶的分离纯化及其性质

以罗非鱼肠为原料，采用超声波辅助提取技术、电泳技术和层析技术等对罗非鱼肠道蛋白酶进行研究，结果表明：将鱼肠匀浆经超声波提取的粗酶液，用30％～70%的硫酸铵盐进行盐析、hitraptm-qff阴离子交换柱纯化及sephadexg-100凝胶柱分离纯化，得到罗非鱼肠蛋白酶纯品，其比活为335u/mg，得率为32.8%；sds-page电泳为单一蛋白酶带，分子量为28ku。该酶最适ph为8.0～8.5，在ph7.0～9.0的条件下稳定；最适温度为37～42℃，热稳定性好；该酶的km值和vmax值分别为0.605g/l和9.407μg/min。金属离子ag+、pb2+对蛋白酶有完全抑制作用，na+、k+对该酶无抑制作用。丝氨酸蛋白酶抑制剂能完全抑制该酶活性，胃蛋白酶抑制剂和脲素对该酶有一定抑制作用，edta没有明显抑制作用，dtt能激活该酶活性，该酶为丝氨酸蛋白酶。