菲律宾蛤仔过敏原可视化抗体微阵列玻片的检测方法

采用辣根过氧化物酶(hrp)与3，3′，5，5′四甲基联苯胺(tmb)h2o2作为信号示踪系统，建立了一种可视化抗体微阵列检测菲律宾蛤仔过敏原的方法。对孵育时间、抗体浓度等免疫条件进行了优化。采用改良双抗体夹心法，将菲律宾蛤仔过敏原的兔多克隆抗体固定于琼脂糖三维芯片上，依次加入待检样品、菲律宾蛤仔鼠多克隆抗体和hrp-羊抗鼠igg，孵育后加tmb显色，肉眼观察后，用平板扫描仪获取扫描图象，采用genepixpro6.0软件分析灰度值。试验结果表明，该方法最低可检出10ng/ml的菲律宾蛤仔过敏原，片内平均变异系数（cv）为5.99%，片间为10.3%；香肠及蟹棒中3个不同浓度的加标回收率为73.54%~95.44%；4℃存放4个月内抗体微阵列玻片活性保持稳定。该方法不需要大型精密仪器，结果直观可见，可以发展为对多种过敏原进行同时检测，具有良好的实用和推广价值。