青石斑鱼胃蛋白酶原的分离纯化及酶学性质

采用硫酸铵盐析、deae-sephacel,deae-sepharose阴离子交换柱层析、sp-sepharose阳离子交换柱层析和sephacryls-200凝胶过滤柱层析,从青石斑鱼的胃中分离纯化到3种胃蛋白酶原(pg-1、pg-2和pg-3),sds-page结果显示,它们的分子量分别为35、36和37ku。在ph2.0下,3种胃蛋白酶原转化为有活性的胃蛋白酶p-1、p-2和p-3,分子量分别约为33、33和34ku。3种酶的最适ph分别为3.0、2.5和2.5,最适温度均为40℃,且均能被典型的天冬氨酸蛋白酶抑制剂pepstatina有效抑制。免疫交叉反应结果表明,3种胃蛋白酶原能与大鼠抗黄鳍鲷pg-ⅰ,pg-ⅱ,pg-3b,pg-3a,pg-4a及pg-4b多克隆抗体发生不同程度的免疫交叉反应。动力学参数测定结果表明,p-1、p-2和p-3对酸变性牛血红蛋白的km、kcat及kcat/km值分别为7.0?10-5mol/l,17.6s-1,2.5?105mol/(l?s);5.5?10-5mol/l,22.8s-1,4.1?105mol/(l?s)和5.2?10-5mol/l,18.7s-1,3.6?105mol/(l?s)。